小滴度，，，，，大问题：病毒滴度是否越高越好？？？？
重组腺相关病毒（recombinant Adeno-associated Virus, rAAV）基因治疗在靶器官（包括眼睛、肝脏、骨骼肌和中枢神经系统）的多项试验中已经证实晰清静性和恒久有用性 。。 。。在临床前和临床研究中，，，，，rAAV基因组拷贝数的准确滴定关于确保准确、和可重复给药至关主要 。。 。。同样，，，，，在科学研究中，，，，，rAAV的基因组拷贝数准确滴定关于获得有用的、稳固的、可靠的、可重复的实验数据有着不可或缺的作用 。。 。。rAAV的基因组拷贝准确滴定即为滴度，，，，，通常是通过丈量衣壳卵白或rAAV基因组来确定的 。。 。。
关于你不知道的滴度
滴度一样平常包括物理滴度和熏染滴度 。。 。。
物理滴度是指：包括病毒基因组的病毒颗粒的浓度 。。 。。物理滴度是通过定量病毒基因组浓度来丈量的 。。 。。物理滴度纷歧定能批注熏染滴度，，，，，rAAV的熏染滴度可以凭证转导靶点而转变，，，，，也可以通过病毒溶液的冻融来改变（Lock et al., 2010） 。。 。。qPCR是现在普遍应用于rAAV载体定量剖析的要领之一 。。 。。
熏染滴度是指：可以转导细胞的病毒颗粒的浓度 。。 。。熏染滴度通常通详尽胞转导测定来定量 。。 。。有研究显示，，，，，rAAV物理滴度与熏染滴度的比约为50:1（Zeltner et al., 2010） 。。 。。
PFU、TU、VG、GC都叫滴度，，，，，傻傻分不清？？？？
重组病毒的滴度有许多种单位体现形式，，，，，好比PFU/mL，，，，，TU/mL，，，，，VG/mL，，，，，GC/mL等，，，，，这些差别主要是由于差别病毒特征来约定俗成的，，，，，现实应用中怎样区分这些差别滴度单位?
PFU/mL：是空斑形成单位，，，，，为Plaque Forming Unit per mL的缩写，，，，，多用于腺病毒、纯粹疱疹病毒等容易引起细胞裂解的病毒载体的滴度标定 。。 。。
TU/mL：是活性滴度单位，，，，，为Transduction Units per mL的缩写，，，，，主要是指可以熏染并进入细胞中的病毒基因组数目，，，，，常用于慢病毒的滴度测定 。。 。。
因此，，，，，我们需要在课题研究历程中关注所用病毒载体的类型和滴度特征来综合判断 。。 。。
是不是rAAV的剂量越高，，，，，效果就越好？？？？
在一些研究中，，，，，针对rAAV衣壳或转基因产品的免疫反应已被确定为导致表达镌汰或完全损失的缘故原由 。。 。。低剂量的rAAV有可能被anti-AAV抗体，，，，，甚至低滴度的中和抗体中和，，，，，从而导致效果不显着，，，，，然而，，，，，过高剂量的rAAV，，，，，随着衣壳剂量的增添，，，，，使得对衣壳特异性T细胞活化，，，，，激活免疫介导从而扫除转导的靶细胞，，，，，导致治疗效果损失，，，，，甚至由于严重的免疫反应导致实验工具的损失（Mingozzi et al., 2013） 。。 。。
因此rAAV的滴度及使用剂量应只管坚持在一定规模内，，，，，并不是越高越好，，，，，以包管使用的最佳效果 。。 。。
图1 载体剂量与系统载体转染后效果之间的关系
（Mingozzi et al., 2013）
怎样准确rAAV滴度？？？？
别人只追求滴度时，，，，，我们还追求更有用；；；；
别人只追求纯度时，，，，，我们还追求更清静；；；；
别人只追求允许时，，，，，我们还追求更真实；；；；
别人只追求周期时，，，，，我们还追求更稳固 。。 。。
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参考文献
[1] Lock, Martin, et al. Characterization of a recombinant adeno-associated virus type 2 Reference Standard Material. Human gene therapy 21.10 (2010): 1273-1285. PubMed PMID: 20486768. PubMed Central PMCID: PMC2957240.
[2] Zeltner, Nadja, et al. Near-perfect infectivity of wild-type AAV as benchmark for infectivity of recombinant AAV vectors. Gene therapy 17.7 (2010): 872-879. PubMed PMID: 20336156. PubMed Central PMCID: PMC2900506.
[3] Mingozzi F, High KA. Immune responses to AAV vectors: overcoming barriers to successful gene therapy. Blood. 2013 Jul 4;122(1):23-36. doi: 10.1182/blood-2013-01-306647. Epub 2013 Apr 17. PMID: 23596044; PMCID: PMC3701904.
[4] Lang JF, Toulmin SA, et al. Standard screening methods underreport AAV-mediated transduction and gene editing. Nat Commun. 2019 Jul 30;10(1):3415. doi: 10.1038/s41467-019-11321-7. PMID: 31363095; PMCID: PMC6667494.
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