在转录后修饰中，，， ，，，N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine, m6A）是mRNA和lncRNAs上最为普遍的修饰之一。。。现在发明microRNA，，， ，，，circRNA, rRNA, tRNA和snoRNA上都有m6A修饰。。。m6A修饰主要爆发在RRACH序列中的腺嘌呤上，，， ，，，其功效主要由Writer、Eraser和Reader决议。。。Writer即甲基转移酶，，， ，，，现在已知这个复合物的因素有METTL3，，， ，，，METTL14, METTL16, WTAP和KIAA1429等。。。而ALKBH5和FTO作为去甲基酶（Eraser）可逆转甲基化。。。现在发明m6A连系卵白（Reader）有YTH结构域卵白（YTHDF1, YTHDF2,YTHDF3,YTHDC1和YTHDC2）和核不均一卵白HNRNP家族（HNRNPA2B1和 HNRNPC）。。。
MeRIP-seq则是研究m6A修饰强有力的手艺之一。。。MeRIP-seq是将MeDIP、RIP及RNA-seq手艺连系起来，，， ，，，在全基因组规模内检测RNA甲基化。。。使用特异性的RNA甲基化抗体举行免疫共沉淀反应，，， ，，，将获得的甲基化修饰片断举行测序，，， ，，，同时，，， ，，，设计Input比照样本消除配景。。。
手艺优势
携手RNA甲基化研究国际着名团队，，， ，，，深度优化实验与剖析流程；；
提炼数十篇顶级RNA甲基化文章思绪，，， ，，，量身定制前沿实验计划；；
提供多组学整合剖析与功效验证一站式效劳，，， ，，，大幅缩短实验周期；；
一流的数据挖掘团队+富厚的论文审稿履历，，， ，，，加速科研效果揭晓。。。
样本起始量与送样建议
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样本类型 |
起始量 |
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细胞 |
>5x106 |
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动物组织 |
>100 mg |
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植物 |
>5 g |
注重事项：详细样本准备指南，，， ，，，请联系在线客服。。。
剖析内容
1. 测序序列统计与质控
2. 参考基因组比对：参考基因组比对Reads统计、参考基因组比对区域漫衍、测序数据比对漫衍
3. 全基因组Peak扫描：Peak calling、Peak注释
4. 差别Peak剖析：差别Peak信息统计、差别Peak基因GO富集剖析、差别Peak基因KEGG富集性剖析
5. Motif剖析
案例展示
客户案例1：m6A调控miRNA初级体识别加工
论文问题：N6-methyl-adenosine (m6A) marks primary microRNAs for processing
刊登日期：2015年03月
揭晓杂志：Nature
影响因子：40.1
研究机构：美国洛克菲勒大学
在miRNA生物合成的第一步是在微处置惩罚卵白复合物的资助下对初级microRNA（pri-miRNA）举行加工。。。微处置惩罚卵白复合物由RNA连系卵白DGCR8和III型核糖核酸酶Drosha组成。。。这个起始事务需要DGCR8识别pri-miRNA发夹上茎和侧翼单链RNA的毗连处，，， ，，，并招募Drosha剪切双链RNA爆发前体miRNA（pre-miRNA）。。。pri-miRNA的加工机制已经被阐释，，， ，，，可是现在并不知道DGCR8在众多具有二级结构的转录本中识别和连系pri-miRNA的机制。。。
本研究中，，， ，，，洛克菲勒大学Dr.Tavazoie教授发明在哺乳动物细胞中，，， ，，，METTL3会使pri-miRNA爆发甲基化，，， ，，，标记的pri-miRNA可以被DGCR8的识别和加工。。。通过miRNA芯片剖析发明，，， ，，，敲低METTL3会降低DGCR8与pri-miRNA的结相助用，，， ，，，引起成熟体miRNA表达量降低，，， ，，，通过未经加工pri-miRNA含量增添。。。体外实验证实m6A会增进pri-miRNA的加工。。。最后，，， ，，，功效验证实验展现METTL3能够促使miRNA成熟。。。以是m6A标记是一个要害的转录后修饰，，， ，，，会增进miRNA生物合成的起始。。。
客户案例2：m6A识别酶HNRNPA2B1介导RNA加工
论文问题：HNRNPA2B1 Is a Mediator of m6A-Dependent Nuclear RNA Processing Events
刊登日期：2015年09月
揭晓杂志：Cell
影响因子：30.4
研究机构：美国洛克菲勒大学
已知m6A是mRNA中最普遍的一种内部修饰方法之一。。。种种转虑谰如mRNA、lncRNA等上携带的m6A修饰能够影响RNA在细胞核中的“运气”如RNA降解以及转录后加工等。。。洛克菲勒大学Dr.Tavazoie教授在文中验证了一种RNA连系卵白HNRNPA2B1能够特异性识别转录本上的m6A修饰。。。这些爆发m6A修饰的位点所在的motif与甲基化转移酶METTL3 motif相匹配。。。别的HNRNPA2B1能够直接与爆发m6A修饰的miRNA初级体（pri-miRNA）相连系，，， ，，，与miRNA微处置惩罚卵白复合物之一DGCR8一起促使pri-miRNA成熟体的加工。。。
参考文献
1. Alarcón C R, Lee H, Goodarzi H, et al. N6-methyl-adenosine (m6A) marks primary microRNAs for processing[J]. Nature, 2015, 519(7544):482.
2. Alarcón C R, Goodarzi H, Lee H, et al. HNRNPA2B1 Is a Mediator of m(6)A-Dependent Nuclear RNA Processing Events.[J]. Cell, 2015, 162(6):1299-1308.
常见问题
1.样本处置惩罚有什么特殊的要求吗？？？
样本处置惩罚要领凭证实验室是否有液氮分为如下两种情形：
有液氮的情形：
组织样品离体后，，， ，，，快速用RNase-free配制的心理盐水/PBS洗濯样本外貌的污渍，，， ，，，并吸干外貌的液体，，， ，，，迅速的将样天职割生长宽高<=0.5cm的小块（一样平常重约100mg，，， ，，，不过无需精准丈量，，， ，，，一样平常需要10个小块左右），，， ，，，将样本放入已标记好名称且预冷好的Rnase-free的螺纹管中（不要将盖子拧死，，， ，，，以免从液氮中取出时破碎），，， ，，，迅速投入液氮中速冻>=1h，，， ，，，然后取出置于-80℃生涯，，， ，，，干冰运输。。。
没有液氮的情形：
提前准备好RNase-free的1.5mL的EP管，，， ，，，向其中加入1mL的RNAfixer。。。
组织样品离体后，，， ，，，快速用RNase-free心理盐水/PBS洗濯样本外貌的污渍，，， ，，，并吸干外貌的液体，，， ，，，迅速的将样天职割生长宽高<=0.5cm，，， ，，，约豌豆巨细的小块（一样平常重约100mg，，， ，，，不过无需精准丈量，，， ，，，一样平常需要10个小块左右），，， ，，，然后投入提前准备好的1.5mL的EP管中，，， ，，，使样本完全浸没在液体中，，， ，，，然后置于-80℃中生涯，，， ，，，干冰运输。。。
注重：实验操作历程中请务必确保无RNA酶污染。。。
2.m6A检测要领有哪些，，， ，，，只能用测序的要领来检测吗？？？
定量要领：LC-MS/MS、EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit（比色法）
高通量测序：m6A-seq（MeRIP-seq）、miCLIP-seq
定量要领只能检测整体m6A水平，，， ，，，无单碱基区分率；；可是测序方规则没有此限制。。。您可以凭证实验的详细需求选择对应的检测要领。。。
