最近科研界什么较量盛行？？？？？
外泌体（Exosomes）是当之无愧的热门话题。。。。岂论在肿瘤领域、神经科学领域照旧代谢领域 ，，，都有大宗的外泌体相关文章揭晓 ，，，以探讨外泌体的功效和机制。。。。
再梳理一下外泌体的基本知识。。。。外泌体是一类巨细为30-150nm、呈茶托状的由脂质双层膜包裹的细胞外囊泡 ，，，普遍保存于细胞作育上清及种种体液中 ，，，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、卵泡液、精液、心包液、乳汁等。。。。外泌体内含有多种卵白质（如TSG101、HSP70等）、核酸（DNA、RNA）和脂质（胆固醇、鞘磷脂等） ，，，这些内容物因释放外泌体的细胞差别而有较量大的差别。。。。
外泌体首先需要从样本中疏散出来 ，，，现在较量公认的疏散要领是超速离心法 ，，，再通过透射电镜（TEM）、纳米粒径跟踪剖析（NTA）、Western Blot等举行判断。。。；；；竦猛饷谔搴 ，，，对外泌体举行标记 ，，，视察外泌体被摄取情形 ，，，再进一步探索外泌体的功效 ，，，如组织修复、肿瘤转移、代谢重修等。。。。下面我们仔细聊一聊外泌体标记的要领：
一、亲脂性染料标记：
现在已揭晓的外泌体文章中 ，，，外泌体大多使用亲脂性染料举行标记 ，，，体内和体外都较多应用。。。。亲脂性染料主要分为两大类 ，，，一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光） ，，，由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳固连系 ，，，以是染色效果较好 ，，，应用较普遍。。。。
图一 PKH67标记的外泌体与神经元之间相互作用
ActaNeuropatholCommun. 2018 Feb 15;6(1):10.
图二 PKH26标记的外泌体与MDA‐MB‐231细胞共作育
Cancer Sci. 2019 Oct;110(10):3173-3182.
二类是Di系列的亲脂性染料 ，，，包括DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光）。。。。其中DiR的红外荧光可穿透细胞和组织 ，，，在活体成像中用来示踪。。。。
图三DiI标记的外泌体通过静脉注射视察在体内器官的漫衍情形
图四 DiO标记的外泌体与HCT116细胞共孵育
图五DiR标记的外泌体再尾静脉注射小鼠结肠癌肿瘤模子
J Nanobiotechnology. 2020 Jan 9;18(1):10.
二、慢病毒介导CD63-GFP表达：
将外泌体的特定卵白CD63和绿色荧光卵白GFP的表达元件构建成质粒再包装到慢病毒中 ，，，随后用此慢病毒熏染细胞 ，，，使细胞渗透的外泌体带有绿色荧光。。。。
图六 用GFP标记的外泌体划分与SH-SY5Y、BV2和DRG细胞共作育
Artif Cells NanomedBiotechnol. 2019 Dec;47(1):2918-2929.
图七 注射有CD63-GFP的外泌体后视察第1天(D1)和第5天(D2)的荧光
Artif Cells NanomedBiotechnol. 2019 Dec;47(1):2918-2929.
三、用金纳米颗粒（gold nanoparticles ，，，GNPs）标记：
将金颗粒标记的外泌体通过鼻内给药不但能举行无创跟踪 ，，，并且能增进外泌体在脑部的积累和延伸在病变区域的保存时间 ，，，增强体内神经成像的效果。。。。因此 ，，，这种外泌体标记手艺可以作为多种脑疾病的强盛诊断工具 ，，，并可能增强基于外泌体的神经恢复治疗。。。。
图八 金纳米颗粒外泌体的制备及体内注射
ACS Nano. 2017 Nov 28;11(11):10883-10893.
图九用金颗粒和PKH26对外泌体举行双标记
ACS Nano. 2017 Nov 28;11(11):10883-10893.
四、用近红外（NIR）荧光探针举行标记：
这是一种使用两亲性探针对NIR荧光标记的外泌体举行内源性检测的要领 ，，，无需对外泌体举行免疫标记或合成或色谱处置惩罚。。。。由于NIR波长的荧光探针能穿透体内组织 ，，，从而提供了从细胞直接转换到体内使用的利益。。。。
图十 未标记外泌体和NIR标记外泌体的原子力显微镜图片
ChemCommun (Camb). 2018 Jun 26;54(52):7219-7222.
五、用Gaussia luciferase（gluc）和截断的lactadherin举行标记：
将gLuc-lactadherin组成融合表达的质粒 ，，，再将此质粒转染细胞 ，，，使细胞渗透的外泌体带有强的萤光素酶活性。。。。将标记的外泌体举行静脉注射入小鼠体内 ，，，看外泌体在组织的漫衍情形。。。。
J Biotechnol. 2013 May 20;165(2):77-84.
文章总结：
外泌体标记对探讨外泌体的功效是必不可少的一个办法 ，，，首先需要视察到外泌体被受体细胞吸收或抵达目的组织、器官 ，，，再检测受体细胞、组织或器官中响应指标的转变 ，，，看外泌体是否具有一定的功效。。。。确定外泌体具有功效后 ，，，再通过高通量测序或基因芯片举行差别表达分子的挖掘 ，，，进一步深入研究机制。。。。
