外泌体(Exosomes)是细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)的一种，， ，，，巨细在30-150nm，， ，，，由细胞内的多泡小体(Multivesicular bodies,MVB)与细胞膜融合后以外渗透的形式释放到细胞外，， ，，，普遍保存于细胞作育上清以及种种体液中，， ，，，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。。
外泌体普遍加入细胞间物质运输与信息转达，， ，，，调控细胞心理运动。。同时，， ，，，外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、增进肿瘤爆发和转移等作用;别的，， ，，，外泌体还可以作为“自然的纳米粒子”来举行药物递送。。
外泌体样本预处置惩罚与疏散、生涯：
外泌体保存于人类或动物的种种体液中，， ，，，我们可以选择差别的样原泉源举行相关的外泌体研究。。由于外泌体是泉源于细胞质膜内陷的含有脂质双分子层膜结构的多泡小体，， ，，，漫衍于胞外基质。。为了获得高纯度的外泌体，， ，，，必需确保有用去除所有的细胞碎片及其他不需要的杂质。。
1）细胞作育上清 2）血浆/血清
3）尿液 4）脑脊液
5）卵泡液 6）宫腔液
7）胆汁 8）羊水
9）腹水 10）胸腔液
差别的实验样本收罗时需要注重的地方纷歧样，， ，，，如细胞作育上清在网络样本前需换成无外泌体血清作育、血浆样本收罗时用一定不可用肝素抗凝管、尿液网络时需要加抑菌剂等。。
从生物体液中疏散外泌体的种种要领已经被开发出来，， ，，，主要凭证外泌体的巨细、密度、免疫特征等特点举行操作。。疏散出高纯度的外泌体是我们后续开展外泌体研究的要害办法，， ，，，现在差速超速离心是外泌体疏散要领中公认的“金标准”，， ，，，也是高分文章中首选的疏散要领。。
外泌体超离大致办法
外泌体判断：
外泌体疏散之后，， ，，，需要经由一系列判断才华确定疏散的是外泌体。。判断要领从物理特征到外貌分子标记物，， ，，，多角度举行判断。。
(1) 透射电镜判断法：简称TEM，， ，，，适合外泌体双层囊膜超微结构视察，， ，，，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。。
外泌体透射电镜图
(2) 纳米颗粒跟踪剖析法：简称NTA，， ，，，该要领能包管外泌体原始状态、检测速率快，， ，，，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。。
外泌体NTA图
(3)Western blot分子标记物检测：外泌体标记卵白包括四跨膜卵白家族，， ，，，如CD9、CD63和CD81；；；；；细胞质卵白，， ，，，如肌动卵白（Actin）和钙磷脂连系卵白（Annexins）；；；；；加入生物功效的分子，， ，，，如凋亡转接基因2互作卵白X（ALIX）、肿瘤易感基因101卵白（TSG101）、热休克卵白（HSP70、HSP90），， ，，，以及细胞渗透的特异性卵白。。
外泌体Western Blot图（Tian Su et al., ACS Nano. 2019）
UG环球生物 一直致力于提供外泌体研究整体解决计划，， ，，，含实验设计、外泌体疏散、外泌体判断、外泌体分子检测到外泌体示踪和体内外功效验证。。
外泌体高通量检测
外泌体内含有与细胞泉源相关的卵白质和核酸，， ，，，可以运输卵白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等进入受体细胞，， ，，，加入细胞间通讯。。差别细胞泉源的外泌体所含有的卵白因素和RNA不太相同，， ，，，可作为多种疾病的早期诊断标记物，， ，，，也能作为靶向药物的载体举行疾病治疗。。
1. miRNA高通量测序
2. 表达谱芯片（人、小鼠）
3. lncRNA芯片（人、小鼠）
4. ceRNA芯片（人、小鼠）
5. 卵白质组剖析（iTRAQ、TMT、Label-free）
对疏散的外泌体举行体外标记或活体示踪，， ，，，有助于对外泌体的功效举行进一步的研究。。现在常用亲脂性染料对外泌体举行标记，， ，，，亲脂性染料主要包括两类，， ，，，一是PKH67(绿色)和PKH26，， ，，，二是DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)、DiR(深红色荧光)。。
ACS Nano. 2019 Feb 26;13(2):2450-2462.
外泌体的功效研究
视察外泌体具有哪些功效，， ，，，可以将外泌体直接加入受体细胞作育基中，， ，，，与受体细胞举行共作育，， ，，，视察细胞的功效转变，， ，，，或者将外泌体注射入动物模子中，， ，，，视察动物表型转变和检测动物相关指标，， ，，，如肿瘤转移、血糖水平、胰岛素敏感性等。。
Nat Commun. 2018 Jan 15;9(1):191.
