慢性胰腺炎(CP)是一种由遗传和情形因素引起的终身举行性纤维炎性疾。。，，，其特征是腹痛，，，，急性胰腺炎(AP)重复爆发，，，，胰腺功效随着时间的推移而恶化。。CP体现为胰腺损伤、纤维化及胰腺内外渗透功效不全，，，，部分患者最终会生长为胰腺癌，，，，严重危害人民生涯质量及身体康健。。全球规模内，，，，CP的发病率及患病率逐年上升，，，，我国现有确诊CP患者逾100万例，，，，社会经济肩负大。。然而现在还没有根治CP的要领，，，，迫切需要有用的治疗和疾病预防战略。。
丝氨酸卵白酶抑制剂Kazal1型(SPINK1)编码胰腺渗透性胰卵白酶抑制剂(PSTI)，，，，是与胰腺炎相关的主要基因之一。。SPINK1/PSTI在胰腺腺泡细胞中合成，，，，被以为是通过抑制过早激活的胰卵白酶来对抗胰腺炎的第一道防地。。SPINK1基因的功效缺失突变破损了胰卵白酶激活和抑制之间的平衡，，，，导致胰腺炎的爆发和生长。。SPINK1基因过表达能够一连抑制活性胰卵白酶，，，，为治疗CP提供了一种新的要领。。
2024年3月29日，，，，水师军医大学廖专及邹文斌配合通讯在消化领域TOP期刊Gut（IF=25）揭晓题为“Pancreas-directed AAV8-hSPINK1 gene therapy safely and effectively protects against pancreatitis in mice”的研究论文，，，，该研究批注胰腺导向的AAV8-hSPINK1基因治疗清静有用地改善小鼠胰腺炎。。
效果
1. rAAV8-hSPINK1在小鼠体内具有高转导效率和强表达能力
本研究选用衣壳优化（酪氨酸（Y）残基定点诱导突变为苯丙氨酸（F））的AAV8载体，，，，作为正凡人SPINK1基因的递送载体（AAV8-hSPINK1），，，，该载体可镌汰细胞内泛素-卵白酶体降解，，，，提升对胰腺组织的熏染效率。。该研究发明，，，，AAV8-hSPINK1在小鼠胰腺中最佳熏染总量为2E+11vg/只。。该载体在注射体内后第周围hSPINK1表达量达峰，，，，且坚持显著水平至少一连8周。。
图1 AAV8-hSPINK1载体介导hSPINK1在小鼠体内恒久高效表达
2. rAAV8-hSPINK1在减轻雨蛙素诱导的AP水平增进胰腺恢复
雨蛙素是一种胆囊缩短素的类似物，，，，增进胰卵白酶的激活，，，，被普遍用于诱导啮齿类动物的实验性胰腺炎。。为模拟CP急性爆发，，，，研究者构建雨蛙素诱导急性胰腺炎（AP）模子； ；；；；与比照组相比，，，，AAV8-hSPINK1组在注射后8周内，，，，胰/重比、血淀粉酶、胰酶活性、自噬凋亡指标均显著较低，，，，仅对高于250μg/kg雨蛙素敏感，，，，且加速胰腺组织急性期恢复。。
图2 AAV8-hSPINK1载体减轻雨蛙素诱导模子的急性胰腺炎水平
3. rAAV8-hSPINK1可改善雨蛙素诱导的CP模子
为了评估AAV8-hSPINK1在预防CP希望中的有用性，，，，研究者通过雨蛙素重复注射构建CP模子，，，，发明AAV8-hSPINK1组形态学改变不显著，，，，纤维化水平及腺泡-导管化生指标较比照组显著下调，，，，且终止雨蛙素刺激后胰腺组织损伤修复更快。。
图3 AAV8-hSPINK1载体减轻雨蛙素诱导模子的慢性胰腺炎水平
4. rAAV8-hSPINK1可减轻胰管结扎模子的炎症和纤维化
为模拟临床上胰管梗阻性胰腺炎，，，，研究者构建胰胆管结扎急性胰腺炎模子； ；；；；在比照组中胰腺组织概略体现为显着水肿、出血，，，，病理学可见腺泡细胞大宗坏死、大宗炎细胞浸润，，，，而AAV8-hSPINK1组胰/重比、胰腺概略与病理指标均显著改善。。随后研究者于小鼠胰腺胃叶举行结扎，，，，模拟临床胰管结石梗阻，，，，于术后第周围取样视察，，，，发明心理盐水注射组结扎远端胰腺显着萎缩，，，，腺泡细胞大宗丧失，，，，胰腺脂肪沉积，，，，而AAV8-hSPINK1组胰腺病理体现均较轻。。
图4 AAV8-hSPINK1治疗减轻胰管结扎诱导的纤维化
5. rAAV8-hSPINK1改善Spink1突变小鼠胰腺病理改变和胰腺炎易感性
研究者团队前期通过CRISPR/Cas基因编辑手艺乐成构建模拟人突变位点的Spink1 c.194+2T>C小鼠，，，，纯合小鼠（Spink1-/-）出生后致死，，，，杂合小鼠（Spink1+/-）在出生后第14周部分自觉胰腺损伤（33.3%）及纤维化（16.7%）； ；；；；在Spink1+/-小鼠出生后第10周给予AAV8-hSPINK1，，，，第14周视察未见胰腺自觉损伤及纤维化（0.0%，，，，n=12），，，，显著改善Spink1+/-病理表型，，，，增添对雨蛙素的敏感性。。
图5 AAV8-hSPINK1载体阻止Spink1+/-小鼠自觉胰腺损伤及增添其对雨蛙素的敏感性
结论
本研究首次证实AAV8-hSPINK1介导的基因治疗胰腺炎具有较高的转导效率和清静性。。使用衣壳优化的AAV8载体携带hSPINK1特异性清静靶向胰腺，，，，对心、肺、脾、肝、肾的器官趋向性低，，，，转导效率高(最佳表达剂量为2E+11vg/只)。。hSPINK1的表达和疗效在注射后4周密达峰值，，，，并坚持显著水平至少8周。。在所有三种小鼠模子中，，，，发病前单剂量AAV8-hSPINK1显著减轻了胰腺炎的严重水平，，，，减缓了纤维化的希望，，，，降低了胰腺细胞凋亡和自噬水平，，，，加速了胰腺炎的恢复历程。。一次性注射AAV8-hSPINK1清静靶向胰腺，，，，转导效率高，，，，可有用改善小鼠胰腺炎表型。。该要领在预防和治疗CP方面具有辽阔的远景。。
图6 AAV8-hSPINK1介导的三种小鼠胰腺炎基因治疗综述
该研究在上海长海医院/上海市胰腺疾病研究所/免疫与炎症天下重点实验室单位完成,项目获得国家自然科学基金委、上海市教委科技立异妄想、上海市卫生康健委员会重中之重研究中心等项目资助。。
原文链接：https://gut.bmj.com/content/early/2024/03/29/gutjnl-2023-330788
UG环球生物有幸为研究职员提供实验中的衣壳优化的rAAV8载体构建效劳，，，，用现实验动助力基础科学研究光临床转化！
