你的慢病毒表达的LncRNA准确吗???
长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸,,不具有卵白编码能力的线性RNA分子,,基因组DNA转录天生lncRNA后,,一些lncRNA在细胞核内施展功效,,另外一些lncRNA被转运到细胞质,,在细胞质中lncRNA可以调控mRNA稳固性、翻译效率和滋扰卵白翻译后修饰。。。。
LncRNA分类
LncRNA凭证其相对位置在调控靶编码基因中施展主要作用,,凭证其在基因组上与编码基因相对位置的差别,,可以将lncRNA分为以下几类(见图1):1.启动子区(来自启动子区域的转录本);;;2.内含子间(主要爆发于编码基因的内含子区);;;3.双向(与卵白质编码基因共享相同的启动子,,但转录偏向相反);;;4.正义链(转录偏向与卵白质编码基因偏向相同,,保存于统一编码基因正义链,,具有重叠的外显子);;;5.反义链(转录偏向与卵白质编码基因偏向相反,,保存于反义链,,至少有一个外显子重叠);;;6.3’UTR区(来自3’UTR区域的转录本);;;7.基因间(来自于两个卵白质编码基因之间的DNA序列)。。。。与mRNA类似,,lncRNA也可以保存于细胞核或细胞质中,,但主要位于细胞核。。。。
图1 长链非编码RNA分类
泉源:Xiaomei Huang et al., Canner Lett. 2018
LncRNA对基因表达的调控
由于lncRNA的重大性和多样性,,不可简朴地凭证其结构或序列来形貌其功效,,但lncRNA的一个主要作用是调理相近卵白编码基因的表达。。。。LncRNA在差别水平上调理基因表达:
表观遗传修饰
表观遗传修饰是指在细胞核DNA序列不爆发转变的情形下,,基因表达爆发可逆和可遗传的转变,,这种修饰包括染色质重塑、DNA甲基化和组卵白修饰。。。。
1.组卵白乙;;;鹤槁寻滓阴;;;睦淘鼋嘶虮泶铩⒙寻字驶钚曰蛐睦砝。。。。
2.染色质修饰复合物的招募:lncRNA将染色质修饰复合物招募到特定的位点,,介导相关基因的表达或默然。。。。
3.DNA甲基化:通过改变染色质结构、DNA构象、DNA稳固性以及DNA与卵白质的相互作用来控制基因的表达。。。。
转录调控
4.转录调理:LncRNA可抑制靶基因转录因子活性,,抑制其基因表达。。。。如lncRNA的转录滋扰邻近基因的表达;;;lncRNA通过封阻启动子区域滋扰基因表达;;;lncRNA与RNA连系卵白作用,,定位到基因启动子区调控基因表达;;;lncRNA能调理转录因子活性,,调控基因表达。。。。
转录后调控
5.可变剪接:LncRNA可以增进pre-mRNA和可变剪接因子的连系,,有助于发天生熟mRNA。。。。
6.竞争性RNA:LncRNA可以作为miR海绵,,竞争miRNA,,然后扫除对靶基因的抑制。。。。
7.卵白去磷酸化:LncRNA加入卵白去磷酸化。。。。
8.抑制卵白降解:LncRNA与卵白质相互作用并抑制其泛素化降解。。。。
图2 LncRNA在差别水平上调理基因表达
泉源:Xiaomei Huang et al., Canner Lett. 2018
LncRNA虽然不可编码卵白质,,但可以向下游转达信息,,调控基因表达,,批注lncRNA可能作为基于RNA的信息库,,具有与卵白质组学竞争的能力,,在疾病诊断和靶向治疗中甚至比卵白质越发敏感和特异。。。。因此lncRNA的研究越来越普遍。。。。
慢病毒包装系统缺陷
可是,,现在lncRNA慢病毒包装系统普遍保存一些问题:
1.慢病毒是RNA病毒,,lncRNA的转录终止需要polyA,,而polyA会导致慢病毒包装历程中,,慢病毒基因组的表达提前终止,,导致慢病毒包装不乐成;;;
2.通例慢病毒载体表达lncRNA,,由于不可实时终止,,会带有WPRE等无关序列,,从而影响lncRNA的高级结构, 而高级结构是lncRNA施展功效的决议性因素, 这些多余的序列势必对lncRNA的功效造成不可预料的影响;;;
3.有些lncRNA会爆发自切割,,包装时,,慢病毒基因组也可能由于lncRNA的自切割而爆发断裂,,导致出毒失败。。。。
针对以上这些问题,,UG环球生物推出新升级慢病毒系统一次性解决以上问题,,让lncRNA准确表达。。。。
新升级慢病毒系统优势
1.LncRNA精准表达。。。。
2.载体上荧光表达更亮。。。。
3.改善由于基因引起的不出毒,,出毒更稳固。。。。
验证效果:
PCR验证表达准确:
熏染效果图:
UG环球研发团队专注于病毒载体及包装系统举行研发,,对慢病毒主要元件举行刷新和优化,,并获得相关授权专利。。。。
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参考文献
[1] Xiaomei Huang,Xi Zhou., et al. Advances in esophageal cancer: A new perspective on pathogenesis associated with long non-coding RNAs.Cancer Lett.2018 Jan 28;413:94-101.doi: 10.1016/j.canlet.2017.10.046.
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