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你的慢病毒表达的LncRNA准确吗??????

时间:2022-03-23 热度:
 
 
慢病毒是一类刷新自人免疫缺陷病毒的病毒载体,,,,,基因组是RNA,,,,,可将外源基因整合到基因组中实现稳固表达,,,,,借助慢病毒载体可以举行编码基因和非编码基因的过表达、滋扰、敲除和内源性激活等操作,,,,,知足差别的基因操作需求。 。。。。慢病毒的宿主规模广,,,,,免疫原性低,,,,,基因容量大,,,,,可以恒久表达等特点,,,,,使其能够有用地熏染作育的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,,,,,别的,,,,,借助慢病毒载体刷新T 细胞用于CAR-T细胞治疗。 。。。。
 
 

 

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸,,,,,不具有卵白编码能力的线性RNA分子,,,,,基因组DNA转录天生lncRNA后,,,,,一些lncRNA在细胞核内施展功效,,,,,另外一些lncRNA被转运到细胞质,,,,,在细胞质中lncRNA可以调控mRNA稳固性、翻译效率和滋扰卵白翻译后修饰。 。。。。

 

LncRNA分类

LncRNA凭证其相对位置在调控靶编码基因中施展主要作用,,,,,凭证其在基因组上与编码基因相对位置的差别,,,,,可以将lncRNA分为以下几类(见图1):1.启动子区(来自启动子区域的转录本);;;;2.内含子间(主要爆发于编码基因的内含子区);;;;3.双向(与卵白质编码基因共享相同的启动子,,,,,但转录偏向相反);;;;4.正义链(转录偏向与卵白质编码基因偏向相同,,,,,保存于统一编码基因正义链,,,,,具有重叠的外显子);;;;5.反义链(转录偏向与卵白质编码基因偏向相反,,,,,保存于反义链,,,,,至少有一个外显子重叠);;;;6.3’UTR区(来自3’UTR区域的转录本);;;;7.基因间(来自于两个卵白质编码基因之间的DNA序列)。 。。。。与mRNA类似,,,,,lncRNA也可以保存于细胞核或细胞质中,,,,,但主要位于细胞核。 。。。。

 

 

 

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图1 长链非编码RNA分类

泉源:Xiaomei Huang et al., Canner Lett. 2018

 

LncRNA对基因表达的调控

由于lncRNA的重大性和多样性,,,,,不可简朴地凭证其结构或序列来形貌其功效,,,,,但lncRNA的一个主要作用是调理相近卵白编码基因的表达。 。。。。LncRNA在差别水平上调理基因表达:

 

表观遗传修饰

表观遗传修饰是指在细胞核DNA序列不爆发转变的情形下,,,,,基因表达爆发可逆和可遗传的转变,,,,,这种修饰包括染色质重塑、DNA甲基化和组卵白修饰。 。。。。

1.组卵白乙酰;;;鹤槁寻滓阴;;;;睦淘鼋嘶虮泶铩⒙寻字驶钚曰蛐睦砝獭 。。。。

2.染色质修饰复合物的招募:lncRNA将染色质修饰复合物招募到特定的位点,,,,,介导相关基因的表达或默然。 。。。。

3.DNA甲基化:通过改变染色质结构、DNA构象、DNA稳固性以及DNA与卵白质的相互作用来控制基因的表达。 。。。。

 

转录调控

4.转录调理:LncRNA可抑制靶基因转录因子活性,,,,,抑制其基因表达。 。。。。如lncRNA的转录滋扰邻近基因的表达;;;;lncRNA通过封阻启动子区域滋扰基因表达;;;;lncRNA与RNA连系卵白作用,,,,,定位到基因启动子区调控基因表达;;;;lncRNA能调理转录因子活性,,,,,调控基因表达。 。。。。

 

转录后调控

5.可变剪接:LncRNA可以增进pre-mRNA和可变剪接因子的连系,,,,,有助于发天生熟mRNA。 。。。。

6.竞争性RNA:LncRNA可以作为miR海绵,,,,,竞争miRNA,,,,,然后扫除对靶基因的抑制。 。。。。

7.卵白去磷酸化:LncRNA加入卵白去磷酸化。 。。。。

8.抑制卵白降解:LncRNA与卵白质相互作用并抑制其泛素化降解。 。。。。
 

 

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图2 LncRNA在差别水平上调理基因表达

泉源:Xiaomei Huang et al., Canner Lett. 2018

 

 

LncRNA虽然不可编码卵白质,,,,,但可以向下游转达信息,,,,,调控基因表达,,,,,批注lncRNA可能作为基于RNA的信息库,,,,,具有与卵白质组学竞争的能力,,,,,在疾病诊断和靶向治疗中甚至比卵白质越发敏感和特异。 。。。。因此lncRNA的研究越来越普遍。 。。。。

 

慢病毒包装系统缺陷

可是,,,,,现在lncRNA慢病毒包装系统普遍保存一些问题:

1.慢病毒是RNA病毒,,,,,lncRNA的转录终止需要polyA,,,,,而polyA会导致慢病毒包装历程中,,,,,慢病毒基因组的表达提前终止,,,,,导致慢病毒包装不乐成;;;;

2.通例慢病毒载体表达lncRNA,,,,,由于不可实时终止,,,,,会带有WPRE等无关序列,,,,,从而影响lncRNA的高级结构, 而高级结构是lncRNA施展功效的决议性因素, 这些多余的序列势必对lncRNA的功效造成不可预料的影响;;;;

3.有些lncRNA会爆发自切割,,,,,包装时,,,,,慢病毒基因组也可能由于lncRNA的自切割而爆发断裂,,,,,导致出毒失败。 。。。。

 

针对以上这些问题,,,,,UG环球生物推出新升级慢病毒系统一次性解决以上问题,,,,,让lncRNA准确表达。 。。。。

 

新升级慢病毒系统优势

1.LncRNA精准表达。 。。。。

2.载体上荧光表达更亮。 。。。。

3.改善由于基因引起的不出毒,,,,,出毒更稳固。 。。。。

 

验证效果:

PCR验证表达准确:  
 

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熏染效果图:

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UG环球研发团队专注于病毒载体及包装系统举行研发,,,,,对慢病毒主要元件举行刷新和优化,,,,,并获得相关授权专利。 。。。。
 

 

 

 

 
 
 
 

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参考文献

[1] Xiaomei Huang,Xi Zhou., et al. Advances in esophageal cancer: A new perspective on pathogenesis associated with long non-coding RNAs.Cancer Lett.2018 Jan 28;413:94-101.doi: 10.1016/j.canlet.2017.10.046.

 

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