坊间盛传的rAAV载体空壳率大比拼
腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）是表达基因序列的理想载体，，，由于其种类多样、免疫原性低、扩散能力强、宿主规模广等优势在基因功效研究和基因治疗递送载体中占有主导职位。。。现在FDA已批准了两款基于AAV的基因治疗药物，，，近年来，，，随着对AAV衣壳开发和基因组优化的研究深入，，，越发推动了AAV在基因研究和基因治疗领域的应用。。。
腺相关病毒载体
腺相关病毒（Adeno-associated virus，，，AAV）是细小病毒科（Parvoviridae）家族的成员之一，，，是一类无法自主复制、无被膜、具有二十面体结构的细小病毒，，，其直径约20-26nm，，，含有4.7kb左右的线状单链DNA作为基因组。。。
重组腺相关病毒载体（recombinant AAV, rAAV）是在非致病的野生型AAV基础上刷新而成的基因载体，，，研究中接纳的rAAV通常为AAV2型基因组与差别的衣壳卵白连系爆发的混淆体病毒载体。。。
rAAV载体空壳率
随着rAAV载体的基础研究、临床前研究和临床研究的一直深入，，，在rAAV载体制备历程中，，，产品质量稳固性、纯度是产品质控的主要内容。。。
rAAV衣壳是由60个衣壳卵白亚单位组成，，，排列成二十面体结构，，，包括载体DNA基因组。。。在rAAV载体制备历程中，，，除了含有全长DNA基因组的完整rAAV载体外，，，有一定比例的rAAV颗粒不含任何DNA基因组，，，被称为空病毒颗粒。。。在Rep卵白的加入下，，，组装好的空病毒颗粒向核质迁徙，，，而DNA的包装则爆发在已组装完毕的空病毒颗粒迁徙至核质后，，，这增进了形成空病毒颗粒的概率。。。
别的，，，还保存一定比例的含有部分DNA的病毒颗粒，，，DNA太过装载的病毒颗粒，，，以及rAAV多聚体（图1）。。。
图1 rAAV制备历程中爆发的病毒颗粒主要类型（图片泉源：参考文献1）
rAAV载体空壳率高所带来的影响
现有研究发明，，，大宗空病毒颗粒的保存可能会影响rAAV载体的有用性和清静性，，，由于它们可能会增添rAAV载体的免疫原性，，，增添免疫毒性的危害，，，或通过竞争细胞外貌受体连系位点、内吞作用及胞内历程，，，影响rAAV转导效率。。。因此，，，在rAAV载体制备和纯化历程中，，，优化生产工艺、建设有用的纯化要领，，，以降低rAAV空病毒颗粒数，，，尽可能纯化获得含有全长DNA基因组的完整rAAV载体，，，确保rAAV载体清静、稳固、有用，，，是产品质控标准的主要一环。。。
怎样获得空壳率更低、更可控的载体？？
现在关于去除rAAV载体中的空病毒颗粒主要是在病毒纯化历程中实现的，，，战略依赖于rAAV载体和空病毒颗粒的物理性子差别。。。
密度梯度离心法（Density gradient ultracentrifugation, DGC）：空病毒颗粒（不含DNA基因组）和含有部分DNA的病毒颗粒在较低的密度区间群集，，，因此借助碘克沙醇或氯化铯（CsCl）经由多次密度梯度离心后，，，可以很容易将空病毒颗粒与rAAV载体疏散，，，DGC法现在适用于所有血清型的纯化。。。
离子交流层析法（ion-exchange chromatography, IEC）：rAAV载体的等电点会比空病毒颗粒略低，，，因此借助IEC法可以将空病毒颗粒去除。。。IEC法现在在某些血清型载体（如rAAV1、2、6）中去除空壳效果不错，，，然而关于差别血清型的rAAV载体可能需要建设差别的纯化要领。。。
低空壳率rAAV大起底
空壳的腺相关病毒会为科学研究和基因治疗药物开发带来不可控因素和危害，，，因此人们在一直探索控制空壳rAAV载体爆发的步伐。。。浚空壳rAAV的形成与病毒生产时的质粒配比、细胞作育水平、rAAV出毒时间均有一定关系，，，而下游腺相关病毒纯化历程更是镌汰空壳rAAV的主要焦点环节。。。
基于12年、30000+的病毒载体生产履历，，，UG环球生物一连优化病毒生产全流程，，，用更优化的质粒配比、病毒收获时间，，，借助超离、超滤、层析、PEG沉淀等科研及工业生产中的整合纯化工艺，，，一连降低rAAV载体包装中的空壳率，，，可做到<5%空壳率（现实事情中通常<2%），，，为研究者提供更好的基因载体。。。
2021年，，，我们选择统一载体、差别生产厂商的腺相关病毒，，，提倡了空壳率双盲测试，，，电镜效果显示，，，UG环球生物的腺相关病毒空壳率远低于行业一线品牌。。。
质量领先，，，树立行业标杆，，，让基因递送触手可及！
图2 rAAV载体生产空壳率大比拼
为了更好地显示UG环球生物AAV产品的属性，，，我们选取大视野举行较量
图3 UG环球生物rAAV载体生产空壳率
电镜效果：包装DNA基因组的病毒颗粒为实心颗粒（红色箭头）；； ；；；；空病毒颗粒中心保存朴陋（黄色箭头）
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UG环球生物，，，专注于病毒包装效劳，，，专心做科研，，，UG环球生物制备的每一支病毒，，，在分装之前，，，都要经由十几道纯化工艺，，，才华包管病毒纯度，，，UG环球生物GeneDelivery，，，让基因递送触手可及！
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参考文献
[1] Maria Schnödt, et al., Improving the Quality of Adeno-Associated Viral Vector Preparations: The Challenge of Product-Related Impurities. Hum Gene Ther Methods. 2017 Jun;28(3):101-108. doi: 10.1089/hgtb.2016.188.
[2] Andreas L Gimpel, et al., Analytical methods for process and product characterization of recombinant adeno-associated virus-based gene therapies. Mol Ther Methods Clin Dev. 2021 Feb 17;20:740-754.doi: 10.1016/j.omtm.2021.02.010.
[3] 腺相关病毒 : 从病毒光临床. 许瑞安 主编
[4] J Fraser Wright., AAV empty capsids: for better or for worse? Mol Ther. 2014 Jan;22(1):1-2. doi: 10.1038/mt.2013.268.
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