UG环球双十一?科研不缺席 | 双萤光素酶检测实验——机制研究的利器
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双萤光素酶报告系统先容
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应用先容
miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用（降解或抑制翻译），，，，，将目的基因3’UTR（野生型和连系位点突变型）序列构建至载体中报告基因F-Luc的3’端，，，，，通过较量过表达miRNA后，，，，，报告基因表达的改变（萤光素酶的活性下降照旧稳固），，，，，来确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点 。。。。
转录因子主要通过作用于靶基因的启动子起作用，，，，，将目的基因启动子区序列替换报告基因F-Luc的启动子，，，，，通过共表达转录因子后，，，，，报告基因表达的改变，，，，，来确定转录因子与靶基因启动子连系位点及对靶基因的作用 。。。。
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手艺蹊径
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常见应用偏向总结
● 验证miRNA同mRNA靶向互作 。。。。将靶mRNA的3’UTR序列插入报告基因载体，，，，，再共转入该miRNA，，，，，若是萤光素酶活性下降，，，，，则提醒为其靶序列 。。。。
● 验证miRNA同circRNA靶向互作 。。。。将circRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域，，，，，检测萤光素酶活性 。。。。
● 验证miRNA同lncRNA靶向互作 。。。。将lncRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域，，，，，检测萤光素酶活性 。。。。
● 启动子活性剖析 。。。。将启动子区域序枚举行分段截短，，，，，再划分构建入报告基因载体，，，，，检测其启动子活性 。。。。
● 验证特定转录因子同启动子的作用 。。。。将启动子区域插入报告基因载体，，，，，同时在实验细胞中共转该转录因子，，，，，剖析转录因子过表达是否提高萤光素酶活性 。。。。
● 剖析信号通路是否激活 。。。。将该信号通路的下游响应原件序列构建入报告基因载体，，，，，在差别上游信号条件下，，，，，萤光素酶活性代表了通路的下游响应 。。。。
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