2019年8月 ，，，，《Molecular Therapy》杂志刊登了Afrooz Rashnonejad研究组最新事情[3] ，，，，他们借助血清型为9型的腺相关病毒载体(rAAV9)向胚胎期小鼠递送SMN基因 ，，，，增添了治疗后出生小鼠体内的运动神经元数目及SMN卵白表达 ，，，，延伸其寿命 。。。。。。这一研究效果为胎儿基因治疗SMA提供了有用的基础研究支持 ，，，，是胎儿基因治疗取得的一个主要希望 。。。。。。
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rAAV9介导基因通过宫内侧脑室注射在小鼠体内的表达漫衍首先 ，，，，研究职员较量AAV9-EGFP两种差别的子宫内(The intrauterine, IU)注射方法：胎盘注射(intraplacental ，，，，IP)和侧脑室注射(intracerebroventricular ，，，，i.c.v)的转染效率 ，，，，并在新生鼠出生后第一天(P1)和第十四天(P14)使用成像系统(IVIS)视察 ，，，，效果发明 ，，，，随着时间的增添 ，，，，两组幼鼠肩胛间区EGFP荧光信号水平体现出上升的趋势 ，，，，别的 ，，，，接受侧脑室注射的幼鼠在P1检测到大脑中有最高水平的EGFP荧光信号 ，，，，并在P14检测到脊髓中EGFP高表达 ，，，，同时 ，，，，接受胎盘注射的幼鼠在肝脏和腹股沟处EGFP表达水平较高(图1B) 。。。。。。
在P30举行免疫荧光效果显示 ，，，，两周幼鼠的大脑和脊髓处均发明EGFP普遍表达(图1C,D) 。。。。。。与胎盘注射相比 ，，，，侧脑室注射以很高的效率转导幼鼠脊髓(图1C)及大脑皮层、海马DG区和脉络丛(图1D) 。。。。。。
进一步的研究发明 ，，，，相较于胎盘注射 ，，，，将AAV9-EGFP通过侧脑室注射 ，，，，使荧光卵白在小鼠皮层神经元和脊髓运动神经元上的表达较高 ，，，，提醒了通过侧脑室注射 ，，，，AAV9-EGFP更倾向于熏染神经元(图2) 。。。。。。
随后 ，，，，研究职员借助Western blot剖析发明 ，，，，通过侧脑室注射使EGFP卵白在脊髓、皮层、海马等脑区的表达量显着高于胎盘注射的 ，，，，然而 ，，，，在丘脑的表达量显着低于胎盘注射的 ，，，，提醒了将病毒载体介导的EGFP卵白通过侧脑室注射到胎儿的大脑中 ，，，，该病毒进入脑脊液(CSF) ，，，，并以很高的效率转导大脑及脊髓中的神经元(图3A,C) 。。。。。。在其他脏器中 ，，，，侧脑室注射介导EGFP卵白在肝脏和棕色脂肪组织(BAT)等脏器组织的表达量显着低于胎盘注射的 。。。。。。
基于上述实验效果 ，，，，研究职员选择侧脑室注射作为给药方法举行下步的研究 。。。。。。
PART
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产前基因治疗有用缓解SMA小鼠症状
为了研究SMA疾病的胎儿基因治疗 ，，，，研究职员在小鼠胚胎时期(E14.5-E15)侧脑室注射两种rAAV基因治疗载体：单链rAAV(ssAAV)和双链rAAV(scAAV)载体携带的SMN基因(rAAV9-SMN) ，，，，并监测了接受侧脑室注射治疗后小鼠的存活率及足月出生小鼠的体重和寿命(图4A,B) 。。。。。。效果发明 ，，，，未接受治疗的SMA小鼠存活率最低(存活寿命不凌驾14天) ，，，，rAAV载体携带SMN基因的治疗组小鼠存活寿命显著延伸 ，，，，但仍短于野生型康健小鼠(图4B) 。。。。。。别的 ，，，，接受基因治疗的小鼠比SMA小鼠体重更重 ，，，，且略低于康健小鼠的体重(图4C) 。。。。。。
scAAV ，，，，是一个互补的(self-complementary)双链分子 ，，，，不必像古板的ssAAV经由基因组的第二链合成才华启动基因的转录 ，，，，跳过合成双链这一限速办法 ，，，，直接编码SMN卵白 ，，，，快速高效起效 。。。。。。
接下来 ，，，，研究职员借助Western blotting和qRT-PCR手艺剖析发明 ，，，，经由基因治疗的小鼠大脑和脊髓中的SMN卵白获得恢复 ，，，，其表达量高于野生型小鼠的 ，，，，同时 ，，，，scAAV携带的SMN基因表达量最高(图5) 。。。。。。
免疫荧光效果显示 ，，，，与SMA小鼠相比 ，，，，野生型小鼠和基因治疗的小鼠脊髓前角运动神经元中有大宗的SMN表达 ，，，，且运动神经元的数目也显着增添(图6A,B) 。。。。。。别的 ，，，，scAAV9-SMN基因治疗组小鼠的运动神经元及肌肉的形态也获得了改善(图6B,C) 。。。。。。这提醒了纵然是极低水平的SMN基因表达 ，，，，也足以避免肌肉萎缩 。。。。。。
结论
随着胎儿基因组剖析的最新希望 ，，，，医生可以在出生前检测出基因异常 ，，，，早期发明可使治疗妄想在产前或出生后不久实验 。。。。。。别的 ，，，，基于胎儿的特殊心理特征 ，，，，好比体内的干细胞有多项分解潜能、胎儿体积小及其免疫系统尚不健全等为基因治疗提供了奇异的条件 ，，，，使用产前基因治疗可以将治疗基因转染到胎儿 ，，，，可使许多疾病在发病前得以治愈 ，，，，这关于一些早发性遗传性疾病可能是最佳的治疗手段 。。。。。。现在 ，，，，产前筛查手艺的前进和基因转达手艺的突破为胎儿基因治疗研究铺平了蹊径 。。。。。。
在本项研究中 ，，，，研究职员将眼光聚焦产前基因治疗 ，，，，他们借助病毒载体递送手艺、分子生物学手艺等手段发明 ，，，，将rAAV9-SMN通过侧脑室方法注射到胚胎期小鼠体内 ，，，，借助rAAV9病毒载体可高效地将SMN基因递送到小鼠大脑、脊髓等部位 ，，，，实现有用延伸出生后小鼠的寿命 ，，，，增添运动神经元数目 ，，，，改善肌肉萎缩征象 。。。。。。这一研究效果为胎儿基因治疗SMA提供了有用的基础研究支持 ，，，，是胎儿基因治疗取得的一个主要希望 。。。。。。
