小胶质细胞-神经元重编程的构想
中枢神经系统（CNS）主要由神经元和胶质细胞组成。。。。。与外周组织差别，，，，，，成年后哺乳动物中枢神经系统的神经元险些不可再生。。。。。在神经退行病变中（如阿尔兹海默病、帕金森病、亨廷顿病和脑中风等），，，，，，神经元会大宗殒命。。。。。殒命的神经元无法再生，，，，，，从而造成不可逆的严重脑功效损伤。。。。。与静态的神经元差别，，，，，，胶质细胞具有一定的再生能力。。。。。研究职员提出通过病毒工具操控某个分子，，，，，，诱导胶质细胞爆发重编程（reprogramming；；；或转分解：conversion），，，，，，使其分解成神经元，，，，，，实现神经元的原位再生（in situ regeneration）。。。。。从而使用一类可再生的细胞（胶质细胞）增补损失的不可再生的细胞（神经元），，，，，，实现神经退行病变的治疗。。。。。胶质细胞的重编程征象首先由德国马克斯·普朗克神经生物学研究所的Magdalena Götz教授课题组叙述，，，，，，他们在2002年报告了PAX6可诱导星形胶质细胞重编程为神经元1。。。。。随后，，，，，，一系列研究聚焦在该研究领域，，，，，，包括德州大学西南医学中心张春立课题组 (SOX2，，，，，，2013)，，，，，，宾夕法尼亚州立大学的陈作业题组 (NeuroD1, 2014)2，，，，，，HHMI的Marius Wernig和Thomas Südhof课题组 (ASCL1, 2014)3等。。。。。这些计划均是通过操控单个因子，，，，，，将星形胶质细胞转酿成神经元。。。。。虽然星形胶质细胞能够再生，，，，，，可是其再生能力相对较弱（纵然在depletion-repopulation条件下，，，，，，星形胶质细胞平均天天仅能再生0.7%）4。。。。。因而，，，，，，研究职员提出能否通过诱导其他再生能力强的胶质细胞类型重编程为神经元。。。。。
小胶质细胞是中枢神经系统内再生能力最强的胶质细胞。。。。。复旦大学彭勃课题组前期研究发明，，，，，，小胶质细胞于再殖条件下，，，，，，能够通过自我增殖的方法平均天天再生20%的细胞5。。。。。若是能通过诱导小胶质细胞重编程，，，，，，那么将相当于发明了一个无限无尽的补给源，，，，，，可用来大宗增补受损的神经元。。。。。来自日本的Kinichi Nakashima课题组，，，，，，于2019年报道了通过慢病毒异源性表达NeuroD1，，，，，，可诱导小胶质细胞重编程为神经元6。。。。。然而，，，，，，领域内对该征象充满争议。。。。。主要争议集中在其原理性上：（1）前人所发明的星形胶质细胞-神经元重编程，，，，，，两类细胞均是泉源于神经外胚层谱系，，，，，，由radial glia分解而来，，，，，，亲缘关系较近，，，，，，可能会爆发转分解。。。。。而小胶质细胞是由卵黄囊中的髓系细胞发育而来，，，，，，发育谱系差别很远。。。。。若能诱导小胶质细胞-神经元重编程，，，，，，则这是一类跨谱系的转变，，，，，，理论上是难以实现的。。。。。（2）前人所发明介导星形胶质细胞-神经元重编程的因子（如NeuroD1）均是radial glia分解历程中与细胞运气决议相关的因子。。。。。然而，，，，，，NeuroD1并不表达在小胶质细胞所在的髓系谱系中，，，，，，跨谱系表达云云主要的先导因子（pioneer factor）能否有响应的下游元件支持神经外胚层谱系细胞的运气决议亦存疑。。。。。同时，，，，，，近期还保存关于NeuroD1介导的星形胶质细胞-神经元重编程是否是实验假象的重大争议7。。。。。
证实胶质细胞重编程的三个基来源则
惊人且重大的结论必需举行严谨的求证。。。。。在该研究中，，，，，，研究职员提出了充分证实胶质细胞-神经元重编程所需的三个基来源则：
（1）通过严谨的明确的（unambiguous）谱系追踪，，，，，，设置合理设计的比照组（well-designed control）证实，，，，，，并扫除保存病毒走漏的可能性；；；
（2）通过明确的（unambiguous）活体/活细胞成像证据，，，，，，视察到胶质细胞-神经元的转变历程；；；
（3）若是杀掉该类型的胶质细胞，，，，，，那么该因子所介导的胶质细胞-神经元转分解将不会爆发。。。。。
首先是谱系追踪，，，，，，研究职员使用他莫昔芬诱导CX3CR1-CreER::Ai14小鼠的险些所有小胶质细胞特异性表达tdTomato（永世标记，，，，，，纵然细胞运气爆发转变，，，，，，依然会表达tdTomato）。。。。。接下来，，，，，，通过慢病毒hCAG-NeuroD1-T2A-GFP或hCD68-NeuroD1-T2A-GFP熏染小胶质细胞。。。。。若是小胶质细胞表达NeuroD1后能够重编程为神经元，，，，，，那么将能发明一批tdTomato+GFP+神经元。。。。。然而，，，，，，该团队并没有发明这群双荧光标记阳性神经元的保存（图2）。。。。。为了充分验证该征象，，，，，，研究团队在CX3CR1+/GFP小鼠脑内引进CMV-DIO-mCherryforward-(NeuroD1-T2A-GFP)reverse或CMV-DIO-mCherryforward-GFPreverse慢病毒用来熏染脑细胞（图3A）。。。。。若是NeuroD1能够诱导小胶质细胞-神经元重编程，，，，，，则能在第一个病毒处置惩罚后视察到GFP+神经元，，，，，，而作为比照组的第二个病毒将视察不到。。。。。然而，，，，，，岂论是通过哪个病毒诱导，，，，，，均能视察到很高比例的GFP+神经元（图3），，，，，，说明前人所能视察到的“小胶质细胞起源神经元”是来自于实验假象。。。。。理论上，，，，，，在经由他莫昔芬诱导后，，，，，，病毒仅会在小胶质细胞中爆发同源重组，，，，，，从而表达GFP。。。。。可是，，，，，，研究职员视察到的征象说明使用病毒工具载体举行熏染时，，，，，，会陪同有非特异性走漏的危害。。。。。非特病毒走漏可能会导致对实验结论的误读。。。。。
在视察小胶质细胞-神经元转变历程方面，，，，，，研究职员通过活细胞成像方法举行视察，，，，，，并没有发明表达NeuroD1的小胶质细胞爆发到神经元的形态学转变。。。。。恰恰相反，，，，，，研究职员发明表达NeuroD1后，，，，，，会引起小胶质细胞的大规模殒命。。。。。通过BCL2途径可以对抗由NeuroD1小胶质细胞诱导的殒命，，，，，，说明其NeuroD1不但不可诱导小胶质细胞重编程，，，，，，而会诱导小胶质细胞的凋亡。。。。。这也很好诠释了为何前人和该研究团队视察到的“小胶质细胞转变为神经元”假象的比例很高（图3C，，，，，，>90%）的缘故原由：乐成表达NeuroD1的小胶质细胞诱导爆发凋亡而死去，，，，，，因而最后剩下的细胞大都是非特异性走漏细胞。。。。。
最后，，，，，，研究职员通过CSF1R抑制剂PLX5622杀死脑内99%的小胶质细胞，，，，，，发明纵然在这种情形下，，，，，，依然会有很高比例的“小胶质细胞起源神经元”，，，，，，且比例与不杀小胶质细胞的比照组相当（图4）。。。。。因此，，，，，，研究效果越发确认了前人所视察到的“小胶质细胞-神经元重编程”并非真真相形，，，，，，而是来自于病毒非特异性走漏所爆发的实验假象（图5）。。。。。
图4 Even under microglia depleted brain, the “microglia-converted neurons” are detected, reflecting a lentiviral leakage artifact.
换/移植小胶质细胞失控的分子开关
复旦大学彭勃团队使用小胶质细胞的再生能力，，，，，，开发了三种计划（Mr BMT, Mr PB和Mr MT），，，，，，首次在全脑标准上实现小胶质细胞的高效外源性移植/替换9-12。。。。。该计划可用于治疗由小胶质细胞突变引起的疾病。。。。。然而，，，，，，细胞移植所面临的挑战之一是怎样避免外源性细胞失控。。。。。在小鼠模子中，，，，，，常用诱导白喉毒素（DT）表达的方法杀死特征类型的细胞。。。。。由于小鼠没有白喉毒素受体，，，，，，因而殒命细胞所释放出的白喉毒素不会杀死相近的细胞。。。。。然而，，，，，，由于人类细胞保存白喉毒素受体，，，，，，因而该计划不可用于临床实践。。。。。由于NeuroD1可以诱导小胶质细胞凋亡，，，，，，因此该研究团队提出通过体外刷新的方法，，，，，，在移植/替换的小胶质细胞中放入诱导表达NeuroD1的元件。。。。。一旦移植/替换的小胶质细胞失控，，，，，，可以通过该分子开关诱导小胶质细胞凋亡，，，，，，从而提升小胶质细胞替换/移植的清静性。。。。。
