重组腺相关病毒（ Recombinant adeno-associated virus, rAAV）是一种无包膜、以单链DNA为遗传物质、基因组容量4.7kb的复制缺陷型细小病毒。。rAAV具有多种血清型可亲嗜差别靶器官，，，，，，免疫原性极低清静性高，，，，，，2-3周可抵达表达岑岭且长时间稳固表达等特点，，，，，，因此，，，，，，rAAV普遍应用于动物研究、基础研究和基因治疗领域。。
自互补AAV（Self-complementary AAV, scAAV）在rAAV的基础上将其编码区域设计成双链DNA，，，，，，因此scAAV熏染细胞后互补部分互补形成双链DNA，，，，，，然后举行转录、翻译，，，，，，不需期待第二链DNA合成，，，，，，作废了rAAV基因表达的限速办法，，，，，，缩短了最先表达的时间，，，，，，scAAV熏染后一样平常3-5天即可抵达表达岑岭。。但也正是scAAV的双链DNA结构，，，，，，致使其容量缩小至2.1kb，，，，，，因别的源目的基因巨细需要控制在1kb左右。。
图1 ssAAV与scAAV肝脏表达（1E+11 VG/只，，，，，，尾静脉注射）
自互补AAV应用领域
1. 滋扰靶点筛选
短发夹RNA（Short hairpin RNA, shRNA）克隆进病毒载体熏染细胞后，，，，，，在细胞中表达小滋扰RNA（Small interfering RNA, siRNA），，，，，，抑制mRNA转录，，，，，，实现抑制目的基因表达目的。。关于未知的滋扰靶基因的筛选一样平常接纳体外实验的方法举行验证，，，，，，在细胞系上举行验证时常�；嵊龅教逋庥杏霉迥谖扌Ч那樾危�；或在原代细胞上验证，，，，，，原代细胞疏散难度大、作育难度高也同样制约了shRNA的靶基因效果验证；；通例体内筛选靶点的方法又大大的影响了研究的速率。。然而，，，，，，scAAV-shRNA筛选滋扰靶点可以快速并且准确地获得滋扰效果，，，，，，极大的加速了研究的效率。。
2. 基因编辑
CRISPR/Cas9手艺通过对基因水平操作实现基因敲除或基因定点编辑。。使用病毒载体表达向导RNA（guide RNA, gRNA），，，，，，配合Cas9小鼠/病毒，，，，，，可以对小鼠的目的基因举行编辑。。
图3 肌肉注射AAV9基因编辑元件转达到D52 DMD小鼠改善营养不良卵白表达
（Min Y L, et al., Molecular Therapy, 2020）
3. 基因敲降
Cre-LoxP重组酶系统因其特异性子，，，，，，普遍应用在基因敲除（Knock out，，，，，，KO）或敲入（Knock in，，，，，，KI）研究中，，，，，，现在常用转基因小鼠来实现。。转基因小鼠由于构建周期长，，，，，，价钱高，，，，，，繁育时间久，，，，，，部分基因敲除或过表达胚胎致死等缘故原由制约了研究的顺遂举行，，，，，，然而，，，，，，病毒载体可以战胜以上研究中泛起的问题。。scAAV-cre配合Flox小鼠使用，，，，，，可在成年或幼年小鼠上实现快速基因敲降（Knock down, KD）。。
4. 特异性标记
另外，，，，，，使用Cre小鼠或scAAV-Cre配合scAAV-DIO实现越发细腻、快速的细胞标记。。
图5 scAAV-FLEx-mRuby2荧光卵白在HVC(X)细胞群中限制性表达
（Sánchez-Valpuesta M, et al.,PNAS, 2019）
5. 过表达
使用scAAV过表达目的基因可以实现改目的基因在体内快速表达的目的，，，，，，可是值得注重的是，，，，，，由于scAAV容量有限，，，，，，为了包管出毒及熏染效率，，，，，，目的基因只管选择1kb以内。。
图6 scAAV9-GFP熏染皮层，，，，，，三天效果
小结
scAAV具有多种血清型、快速表达、稳固表达、免疫原性相对较低的特点，，，，，，因此适用于多种应用场景。。
